国产美女激情视频-成年女人免费观看视频-爱情交叉点-影音先锋制服丝袜-青青草97国产精品麻豆-这里只有精品在线观看-欧美熟妇交换久久久久久分类-草久久久-国产午夜三级一区二区三-99热这里只有精-久久精品国产免费-国产成人精品一区二-91香蕉视频污污-四虎影院在线观看免费-日韩狠狠操-看片国产-久久精品超碰-二级毛片视频-成人日韩在线观看-欧美日韩精品丝袜-欧美韩一区二区-曰韩在线-丰满人妻一区二区三区无码av-五月天堂婷婷-久久免费的精品国产v∧-天天爱天天操天天射-国产在线视频福利-听了会硬的30秒娇喘女语音

一、原理

酶聯免疫吸附試驗ELLSA試劑盒是一種固相酶免疫測定的方法，目前廣泛應用于各種抗原和抗體的檢測。其基本原理是將抗原或抗體固定在固相載體表面，并保持其免疫活性，再與酶標記抗體或抗原聯結，并保留酶的活性，然后加入酶反應的底物，后者被酶催化變為有色產物，反應顏色的深淺可與相應抗原或抗體的量相關。在本實驗中，（1）用已知抗體包被固相載體；（2）加入受檢的標本（含待測抗原），使抗原與固相上的抗體結合；（3）加入以辣根過氧化物酶標記的已知抗體，使之與抗原結合。標記的酶可催化底物（四甲基聯苯胺）起顯色反應，從而指示特異性抗原抗體反應的存在。

二、器材與試劑

器材：

（1）50~250μl可調微量移液器與移液頭（2）37℃培養箱、搪瓷盒（3）酶標架（4）洗瓶（含洗滌液）、吸水毛巾（5）酶標檢測儀

試劑：

（1）已包被抗體的酶標條（2）400μg/L抗原溶液（3）抗原稀釋液（4）待測標本1、2（5）酶標抗體（6）洗滌液（pH7.2 PBS-Tween 20）（7）底物A、B溶液（8）終止液

三、操作步驟

ELLSA試劑盒取已包被抗體的酶標板，分別在第1~6孔各加入抗原稀釋液100 ul，第6、7孔各加入400μg/L抗原溶液100 ul，從第6~2孔進行對倍稀釋（zui后在第2孔吸出的100 ul棄去）；在第8、9孔各加入100 ul待測標本1；在第10、11孔各加入100 ul待測標本2。置酶標板于37℃，保溫30分鐘。

棄去孔內液體，以洗滌液注滿孔內，置3分鐘后甩干孔內液體，重復3遍。上述孔內再加入酶標抗體100ul。置37℃，保溫30分鐘。

棄去孔內液體，以洗滌液注滿孔內，置3分鐘后甩干孔內液體，重復4遍。

各孔均加底物A和底物B溶液各100ul，混勻。置37℃，10分鐘左右加入終止液50ul 中止反應。

將酶標板置酶標儀上比色，以第1孔調零，在450nm波長處讀取光密度值（O.D值）。

結果判斷：以O.D值為縱坐標，抗原標準濃度（0;12.5;25;50;100;200;400μg/L）為橫坐標在半對數坐標紙上畫出標準曲線，再根據樣品的平均O.D值在標準曲線上查出各自的含量。

四、ELLSA試劑盒操作注意事項

正確掌握微量移液器的使用方法：吸液時將按鈕按至*止點，排液時則應盡力按足按鈕（至第二止點）。

酶標板的正確洗滌：加洗滌液時應小心，勿使洗滌液溢出，流入周圍孔中，造成交叉污染。洗滌后應盡量甩干孔內殘液。洗滌液加入孔后，須保持三分鐘再棄去。

注意加樣順序，加樣品時應注意從zui高稀釋度逐一加至zui低稀釋度。