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操作步驟
原代細(xì)胞是人工模擬細(xì)胞在體內(nèi)生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，是提供細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)。培養(yǎng)液或培養(yǎng)基的含義幾乎相同，英文都是medium。當(dāng)它是粉劑時(shí)，傾向性地稱(chēng)為培養(yǎng)基，而將粉劑配成液體后，多稱(chēng)為培養(yǎng)液。培養(yǎng)液中常常補(bǔ)加血清、抗生素等成分。

一、復(fù)蘇

 1.把凍存管從液氮中取出來(lái)，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動(dòng)。液體都融化后(大概1-1.5分鐘)，拿出來(lái)噴點(diǎn)酒精放到超凈工作臺(tái)里。

 2.把上述細(xì)胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中(用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細(xì)胞都洗下來(lái))，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

 3.把上清液倒掉，加1ml培養(yǎng)基把細(xì)胞懸浮起來(lái)。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動(dòng)，使培養(yǎng)皿中的細(xì)胞均勻分布。

 4.標(biāo)好細(xì)胞種類(lèi)和日期、培養(yǎng)人名字等，放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁后換培養(yǎng)基。

 5.3天換一次培養(yǎng)基。

 二、傳代

 1.培養(yǎng)皿中的細(xì)胞覆蓋率達(dá)到80%-90%時(shí)要傳代。

 2.把原有培養(yǎng)基吸掉。

 3.加適當(dāng)?shù)?/span>(能覆蓋細(xì)胞就行)，消化1-2分鐘。

 4.細(xì)胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。

 5.用移液槍吹打細(xì)胞，把細(xì)胞都懸浮起來(lái)。

 6.把細(xì)胞吸到15ml的離心管中，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

 7.倒掉上清液，加1-2ml培養(yǎng)基，把細(xì)胞都吹起來(lái)。

 8.根據(jù)細(xì)胞種類(lèi)把細(xì)胞傳到幾個(gè)培養(yǎng)皿中。一般，癌細(xì)胞分5個(gè)，正常細(xì)胞傳3個(gè)，繼續(xù)培養(yǎng)。

 三、凍存

 把細(xì)胞消化下來(lái)并離心(同上)。用配好的凍存液把細(xì)胞懸浮起來(lái)，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鐘，寫(xiě)明細(xì)胞種類(lèi)，凍存日期4℃30min，-20℃30min，-80℃過(guò)夜，然后放到液氮灌中保存。

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